2023 Szerző: Sophia Otis | [email protected]. Utoljára módosítva: 2023-05-21 01:49
New Haven, Conn. – A Yale kutatói beszámoltak egy módszerről, amellyel megszámolható az élő sejtben lévő egyedi fehérjemolekulák abszolút száma, és pontosan meg lehet mérni, hogy hol találhatók. Ez a biológia kvantitatív tanulmányozásának két alapvető akadálya.
"A módszer lehetővé teszi a sejten belüli fehérjék pontos mérését olyan mikroszkópos módszerekkel, amelyeket általában csak a fehérjék elhelyezkedésének kimutatására használnak" - mondta Thomas D. Pollard, M. D. vezető szerző, a molekuláris, sejt- és fejlődéstudományok elnöke és Higgins professzora. Biology at Yale, a Science-ben megjelent munkáról.
Jian-Qiu Wu posztdoktori munkatárs egy sárga fluoreszcens protein nevű címkét csatolt az érdeklődésre számot tartó fehérjékhez, lehetővé téve ezeknek a fehérjéknek az élő élesztősejtekben történő kimutatását fénymikroszkóppal. Hét mintafehérjét használt annak bizonyítására, hogy a fluoreszcencia fényessége közvetlenül korrelál a sejtben lévő fehérje mennyiségével.
Ezzel a hivatkozással egy halom képet készíthettek bármely olyan teljes sejtről, amely megjelölt fehérjét állít elő, megszámolhatják az összes fluoreszcens jelet, és kiszámíthatják a molekulák számát a szabványos mintafehérjékkel való összehasonlítással. A vizsgálat azt vizsgálja, hogy a molekulák szétszórva vannak-e, vagy a sejt bizonyos részein koncentrálódnak-e, így a sejt különböző helyein lévő molekulák számát is megszámolhatják.
Wu több mint kéttucatnyi fehérje általános és helyi koncentrációját vizsgálta. Egyes szabályozó fehérjéknek csak néhány száz kópiája volt, míg a közönséges fehérje aktinnak több millió másolata volt. A mérések először tárták fel az olyan struktúrákat alkotó fehérjék arányát, mint például az „összehúzódó gyűrű”, amely a sejteket osztódás közben szétcsípi.
„Az élesztővel foglalkozó embereknek azonnal tudniuk kell ezt a módszert használni” – mondta Pollard. "A fehérjék megjelölése génjeik manipulálásával más élőlényekben kicsit bonyolultabb, de bizonyos munkával elvégezhető – még az emberi vagy növényi sejtekben is."
"Meglepő, hogy korábban senki sem végezte el ezt a kalibrálást. A biológia inkább leíró jellegű" - mondta Pollard. "Ez a technológia a mozgásbiológia része, hogy kvantitatívabb és mechanikusabb legyen. Nem értheted meg a sejtek kémiáját és fizikáját a fehérjék koncentrációjának ismerete nélkül."
A munkát a National Institute of General Medical Studies és a Yale Egyetem Anna Fuller ösztöndíja finanszírozta.
Idézet: Science 310: 310-314 (2005. október 14.).
